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全血/組織/細胞基因組DNA快速提取詳細操作步驟

更新時間：2021-03-10　點擊量：3995

全血/組織/細胞基因組DNA快速提取試劑盒

Rapid Genomic DNA Kit

產(chǎn)品信息：

試劑盒組成	保存	DL110-01 100 次	DL110-02 200 次
RNaseA（10mg/ml）	室溫	300μl×2	300μl×4
裂解液 TL	室溫	25ml	50ml
緩沖液 BB	室溫	50ml	100ml
結(jié)合液 CB	室溫	30ml	60ml
抑制物去除液 IR	室溫	50ml	100ml
		25ml	25ml×2
漂洗液 WB 室溫 *第-次使用前按說明加指-定量乙醇**
洗脫緩沖液 EB	室溫	15ml	15ml ×2
蛋白酶 K（20mg/ml）	-20℃	1ml×2	1ml×4
吸附柱 AC	室溫	100 個	200 個
收集管（2ml）	室溫	100 個	200 個

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。RnaseA、蛋白酶 K 可室溫運輸，建議-20℃長期保存。

產(chǎn)品介紹：

*的結(jié)合液/蛋白酶 K 迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點：

1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2 提取純度高，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值達1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot

和各種酶切反應(yīng)。

3. 簡單快速，一小時內(nèi)即可獲得超純的基因組DNA

4. 廣泛：適用于血液、多種動物細胞和動物組織等。

注意事項：

1. 結(jié)合液CB 或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。

3. 結(jié)合液CB和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH 大于7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：第-次使用前請先在漂洗液WB 中加入指-*定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 處理材料

a. 血液

如提取材料為血液，可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足220µl用緩沖液BB補足220µl，振蕩混勻。

注意：如需處理更大體積血液，如300μl-1ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl紅細胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000rpm離心1 min（**若離心機-高轉(zhuǎn)速不允許，也可3000rpm離心5 min，吸去上清，留下白細胞沉淀，加220μl緩沖液BB，振蕩至混勻。紅細胞裂解液本公司另外有售，可根據(jù)需要來決定購買。**

b. 如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量 5-20μl，可加緩沖液 BB 補足 220μl 后進行下面的裂解步驟。

c. 貼壁培養(yǎng)的細胞應(yīng)先處理為細胞懸液，然后 10,000rpm 離心1min，棄上清，加 220μl緩沖液BB，振蕩至*懸??；

d. 動物組織（脾組織用量應(yīng)少 10mg）應(yīng)先打碎處理為細胞懸液，然后10,000rpm離心1 min，倒盡上清，加220μl 緩沖液BB，振蕩至*懸浮。

2. 提取組織培養(yǎng)細胞和動物組織DNA時為清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5min。

3. 加入20µl蛋白酶K，振蕩混勻，置于55℃水浴中消化處理。

a. 提取血液基因組時，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進行下一步。

b. 提取細胞基因組時，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進行下一步。

c. 提取組織基因組時，加入Proteinase K混勻后，在56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進行下一步驟。

注意：不同組織裂解時間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會影響后續(xù)操作。每小時顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可

5.加入結(jié)合液CB并充分混勻后，置于70℃水浴10 min，等溶液變清亮，12,000rpm短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。當血液體積≤200μl且沒有采用紅細胞裂解處理，或是樣本儲存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒有團塊等沉淀

6.加入220µl的無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱AC放回收集管中。

8.加入500µl抑制物去除劑IR，12,000rpm離心1 min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。

9.加入500µl 漂洗液WB，12,000rpm離心30 sec。（使用前請檢查是否已經(jīng)加入無水乙醇）倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。

10. 重復(fù)步驟9的操作。

11. 將吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm離心2 min，倒掉廢液。將AC吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。

在吸附膜的中間部位加 500-100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 2-5 min，12,000 rpm 離心 1 min。為了提高基因組 DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置 2-5 min，12,000rpm 離心1min。

(注意: DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA 降解)

實驗代做服務(wù)：

ELISA試劑盒免費代檢測	CCK8檢測	HE染色	蛋白相互作用分析
Western Blot	免疫組化IHC染色	熒光定量PCR	動物模型服務(wù)
流式細胞檢測	免疫熒光染色	激光共聚焦	DNA甲基化實驗
石蠟/冰凍切片	透射電鏡服務(wù)	掃描電鏡實驗	蛋白雙向(2-D)
動物實驗	免疫共沉淀	原位雜交（FIsh）	蛋白質(zhì)純化
分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)	組蛋白甲基化磷酸化乙?；?/a>	蛋白雙向2D-WB	藥理毒理動物實驗
番紅O固綠染色	明膠酶譜MMP	酶活性檢測	動物造模/模型實驗服務(wù)

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產(chǎn)品信息：

注意：不同組織裂解時間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會影響 后續(xù)操作。每小時顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。

(注意: DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA 降解)

注意：不同組織裂解時間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會影響后續(xù)操作。每小時顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。